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根据Journal of Gene Medicine的统计,截至2006年,在全球1192项基因治疗临床试验方案中,有305项(26%)使用腺病毒载体,首次超过反转录病毒,居第一位。腺病毒易于制备、纯化和浓缩,且病毒滴度可高达10^12PFU/ml,比逆转录病毒高出100,000倍以上。所以,它介导的基因治疗常采用in vivo的方式进行,是目前基因治疗临床试验中应用最多的一种载体。 在过去的2014年,使用腺病毒载体研究的客户越来越多,慢慢成为一种常规的科研手段。
红土生物组建了专业的技术团队开展重组腺病毒相关技术服务,提供Ad2和Ad5两种血清型重组腺病毒载体构建、扩增、纯化以及相应的技术咨询服务,如腺病毒载体的细胞感染方法,腺病毒载体相关的动物实验操作等。
★1、腺病毒穿梭载体的构建
客户提供含有目的基因的原始质粒,红土生物将该目的基因克隆至穿梭载体。
★2、腺病毒载体的同源重组
利用重组技术将目的基因的表达框从穿梭载体转移到腺病毒载体,由于腺病毒骨架质粒与穿梭质粒分别有两段序列相同的同源臂,同源重组后,挑取重组子进行酶切鉴定,挑选酶切鉴定正确的克隆,进行下一步腺病毒载体的包装。
★3、腺病毒载体的包装与扩增
将筛选到的重组腺病毒载体运用脂质体法转染到293细胞中进行包装,将包装好的病毒超速离心收集,经过纯化后提供给客户至少达到1×10^12vp以上的病毒量,可直接用于干细胞和动物实验(根据客户需要,不同量有价格差异)
红土生物使用的重组腺病毒系统,除了克隆阳性率高、包装稳定、出毒迅速、滴度高外,最大特点在于加入了调控基因,可以根据实验需要人为调控目的基因的表达程度,另一方面,红土生物使用的重组腺病毒系统,几乎可以在腺病毒容量内转入任何目的基因,具有同类产品不可比拟的优势。