品牌:AdvCell
发货:3天内
★ 产品号
Cat No: BCSFM0001
★ 产品组成
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名称 |
产品号 |
规格 |
储藏条件 |
运输 |
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AdvCell® 免疫细胞基本培养基 AdvCell® Immune Cell base Medium |
BICBM0001 |
500 ml |
2-8℃避光 |
冰袋/常温 |
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AdvCell® 免疫细胞添加物A AdvCell® Immune Cell Culture Supplement A |
BICS0001A |
20 ml |
-20℃避光 |
干冰 |
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AdvCell® 免疫细胞添加物B AdvCell® Immune Cell Culture Supplement B |
BICS0001B |
1 ml |
-20℃避光 |
干冰 |
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AdvCell® 细胞垫 AdvCell® Cellpad |
BCP0001 |
100 ml |
2-8℃避光 |
冰袋/常温 |
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AdvCell® 细胞吸附物 AdvCell® Cell Adheresin |
BTA001 |
1 ml |
-20℃避光 |
干冰 |
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AdvCell® CIK细胞添加物A AdvCell® CIK Cell Culture Supplement A |
BCIKS001A |
1 ml |
-20℃避光 |
干冰 |
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AdvCell® CIK细胞添加物B AdvCell® CIK Cell Culture Supplement B |
BCIKS001B |
1 ml |
-20℃避光 |
干冰 |
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AdvCell® CIK细胞添加物C AdvCell® CIK Cell Culture Supplement C |
BCIKS001C |
1 ml |
-20℃避光 |
干冰 |
★ 产品适用范围
适用于人及哺乳类来源的CIK细胞的诱导与培养。
★ 培养条件
37℃，5％ CO2 无菌恒温培养。
★ 操作步骤
1.培养皿的包被：按一个10-cm培养皿的表面积计算，将2 ml AdvCell® 细胞垫（BCP0001）与20 µl
AdvCell® 细胞吸附物（BTA001）混合后加入培养皿中，4℃下包被过夜。
2.按常规免疫细胞培养的一般准则，如需在生物反应器或培养袋中高密度培养，应优化条件来确定最佳的
操作步骤。使用前将BCSFM0001中的3种组分按如下体积比在37℃下解冻之后混合混合成半完全培养
基: 500 ml AdvCell® 免疫细胞基本培养基（BICBM0001）、20 ml AdvCell® 免疫细胞添加物A
（BICS0001A）、1 ml AdvCell® 免疫细胞添加物B（BICS0001B）。
3.从患者50 ml全血经淋巴细胞分离液分离，获得约5×107个单个核细胞。 将细胞悬浮于30 ml以上
半完全培养基中，细胞浓度为约1.5-2.0×106/ml。
4.按10 ml加入20 µl的量，加入AdvCell® CIK细胞添加物A（BCIKS001A）。于37℃，5％CO2培养箱
条件下培养。培养24小时后（也可在培养开始），加入AdvCell® CIK细胞添加物B（BCIKS001B）。
5.过3-4天后按10 ml加入20 µl的量加入AdvCell® CIK细胞添加物C（BCIKS001C）。
6.在5-6天，加入等倍体积的新鲜半完全培养基，并按10ml加入20 µl的量补加AdvCell® CIK细胞添加
物C（BCIKS001C）。
7.在7-14天，每天根据培养基颜色变化，确定是否需要添加新鲜的半完全培养基，并相应补加AdvCell®
CIK细胞添加物C（BCIKS001C）。可以多个培养瓶，也可加入培养袋培养。
8.培养至10 d，要求检测细菌真菌培养阴性；台盼兰拒染试验活细胞＞95％。
9.在第13、14天（d13，d14），取1×105个细胞做流式检测细胞亚型，并收集细胞悬液离心去上清后，
再用含2 g/L白蛋白IL-2 100 IU/ml的生理盐水洗涤2次，最后将细胞悬于400 ml含20 g/L白蛋白
及IL-2 1000 IU/ml的生理盐水中。如此制备的CIK细胞可以 通过输血器经静脉回输给患者。
