品牌:AdvCell
发货:3天内
★ 产品号
Cat No : BSM0003
★ 产品组成
名称 |
产品号 |
规格 |
贮藏条件 |
运输 |
AdvCell® 脐带干细胞基础培养基 AdvCell® Umbilical Cord Stem Cell base Medium |
BM0004 |
500 ml |
2-8℃避光 |
冰袋/常温 |
AdvCell® 胎牛血清 AdvCell® Fetal Bovine Serum |
BS0001 |
25 ml |
-20℃避光 |
干冰 |
AdvCell® 脐带干细胞培养添加物 AdvCell® Umbilical Cord Stem Cell Culture Supplement |
BSM0003 |
1 ml |
-20℃避光 |
干冰 |
★ 产品适用范围
适用于人及哺乳类来源的脐带干细胞的培养。
★ 使用注意事项
1. 完全培养基的制备:将以上AdvCell® 脐带干细胞血清培养基(BSM0003)中的AdvCell®
脐带干细胞基础培养基 (BM0004)、AdvCell® 胎牛血清 (BS0001)、AdvCell® 脐带干细胞培养添加
剂(BSM0003)于37℃解冻并迅速混合。
2. 完全培养基的存储:配制好的完全培养基放在4℃冰箱避光保存,并尽量在一个月内使用完。
3. 根据需要,培养过程中可添加一定剂量青霉素∕链霉素(P∕S)。
4. 如客户自制的冻存液冻存的细胞是用作临床治疗,应避免用甘油作为保护剂。
★ 培养条件
37℃,5% CO2,无菌恒温培养。
★ 相关操作
【复苏】
1.将完全培养基放入37°C水浴中预热;
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续孵育细胞);
3.在超净台中加入5 ml的 完全培养基重悬细胞,1000 rpm离心5 min;
4.弃上清,加入5 ml的完全培养基重悬细胞,转移到T-25细胞培养瓶中(带滤芯);
5.将培养瓶置于37℃,5% CO2 的无菌培养箱中培养;
6.第二天用新鲜的完全培养基给细胞换液。
【培养】
1.在显微镜下观察细胞,当细胞融合度达到80%时,即可传代培养;
2.37℃水浴预热培养基;
3.在超净台中,弃掉T-25细胞培养瓶中的完全培养基,加入2 ml PBS清洗,再加入1 ml 0.25%胰酶-EDTA
消化细胞;
4.在显微镜下观察到细胞变圆,有细胞开始脱离瓶壁时,即可加入5 ml 完全培养基 终止消化;
5.用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞,并轻轻吹打将细胞吹散;
6.将细胞转移至15 ml离心管中,1000 rpm离心5 min;
7.弃上清,加入15-20 ml的 完全培养基重悬细胞后转入T-75细胞培养瓶中或按适当比例接种到T-25细胞培养瓶中(确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间),细胞密度在1×104cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25 瓶),混合细胞悬液,确保细胞均匀分布;
8.将培养瓶置于37°C,5% CO2 的无菌培养箱中培养;
9.每两天用新鲜、预热的完全培养基进行换液。
【冻存】
1. 细胞消化和计数,用胰酶对待冻存的细胞进行消化,并对细胞进行计数;
2. 1000 rpm离心5分钟,去掉上清;
3. 根据细胞计数的情况,加入适量的冻存液,使细胞密度在1×106/ml左右(或根据自己希望达到的细胞
密度);
4. 轻轻地重悬细胞(务必重悬均匀),将重悬的细胞按等份加入到灭菌的冻存管(需提前做好标记或者贴
上标签)中,旋紧冻存管盖;
5. 将冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒直接放入-80℃;
6. 第二天将细胞从-80℃转移到液氮中。