品牌:AdvCell
发货:3天内
★ 产品号
Cat No : BHSC0001
★ 产品组成
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名称 |
产品号 |
规格 |
储藏条件 |
运输 |
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AdvCell® 造血干细胞基本培养基 AdvCell® Hematopoietic Stem Cell base Medium |
BHSCBM0001 |
500 ml |
2-8℃避光 |
冰袋/常温 |
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AdvCell® 造血干细胞添加物A AdvCell® Hematopoietic Stem Cell Supplement A |
BHSCS0001A |
20 ml |
-20℃避光 |
干冰 |
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AdvCell® 造血干细胞添加物B AdvCell® Hematopoietic Stem Cell Supplement B |
BHSCS0001B |
1 ml |
-20℃避光 |
干冰 |
★ 产品适用范围
适用于人及哺乳类来源的人及哺乳类造血干细胞的培养及扩增。
★ 培养条件
37℃，5％ CO2 无菌恒温培养。
★ 操作步骤
以下过程作为常规造血干细胞培养的一般准则，如需在生物反应器或培养袋中高密度培养，应优化条件来确定最佳的操作步骤，BHSC0001中各组分（BHSCBM0001、BHSCS0001A、BHSCS0001B）在使用前37℃解冻之后混合制备成完全培养基。
【细胞培养】
1.经磁珠或其他方法富集的造血干细胞在37℃的水浴快速解冻或温浴（〈1 分钟）。
2.用生理盐水洗涤细胞后，加入AdvCell® 造血干细胞培养完全培养基，并迅速加入细胞生长因子
（SCF：50 ng/ml, GM-CSF:20 ng/ml, G-CSF: 20 ng/ml, IL-3:20 ng/ml, IL-6:20 ng/ml, EPO:3 U/ml,
TPO:4 U/ml）。
3.在37℃，5％CO2 的潮湿培养箱中或生物反应器中培养细胞，给予并维持细胞在对数期生长所需要的营养。为了保持细胞在对数期的增长，当细胞密度超过1×106/ml 时，需要分离传代，维持细胞密度在0.5-1×106/ml（例如， 2×106个细胞/ml 以上，按1：4 比例0.5×106 细胞/ml）。在静态平板培养中为了获得最佳的气体交换，建议培养基深度不超过1 到1.2 cm。
4.将离心机的升速与降速调至最低，400 g 离心 30 min；离心结束后，用 5 ml 移液管吸取中间白膜层于
新的 50 ml 离心管，并用生理盐水洗涤离心两次，以去除多余血细胞。
5.当细胞生长到第三天离心换液 （340 g离心10 min）更换新鲜培养基及相关细胞因子。
6.当培养液体积大于 150 ml 或细胞数量大于 1.5 ×108 时则需转移至培养袋培养（气泡尽量排空，以
免影响细胞生长）。
7.当细胞达到所需剂量时，即可离心收集细胞待用。
