小鼠IgG3亚类单抗腹水纯化试剂盒

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小鼠IgG3亚类单抗腹水纯化试剂盒使用说明书

 

 在您使用本产品前请认真阅读说明书，这对您顺利完成实验很有帮助。

一、货号：C080204（50mL纯化量）

二、试剂原理：

本试剂盒利用不同蛋白需要的沉淀试剂和沉淀条件不同，通过大量实验分析验证而得到的一个与传统沉淀纯化完全不同的精细的具有高活性、高产率、快速以及良好重复性的单克隆抗体的纯化方法。

三、试剂特点：

本试剂盒特点在于纯化操作的简单化、所得抗体的高活性和高纯度。实验表明，本试剂盒可以得到90%左右纯度的抗体；并且由于配方考究，抗体在纯化过程中几乎没有损伤，完全保持应有的活性，实际应用极好。

四、适用范围：

本试剂盒适用于小鼠IgG3亚类的单克隆抗体腹水的纯化，不能用于IgM和IgA类和其它IgG亚类的单克隆抗体腹水的纯化实验。

五、试剂组成：

六、纯化步骤：

1、将单克隆抗体腹水从冰箱中取出，室温避光放置15分钟，然后用凉水边冲边摇匀快速解冻。

2、将化开的单克隆抗体腹水12000RPM 室温离心10-20分钟。

3、先吸弃最上面浮沫和油脂，然后将上清转出到另一个干净容器或离心管；按每1毫升单克隆抗体腹水加入纯化液A 1毫升，室温避光倒转20分。

4、8000-12000RPM 室温离心10-20分钟，沉淀用纯化液B溶解到原单克隆抗体腹水1/2体积；再按每毫升加入纯化液C 1毫升，室温避光倒转10分钟。

5、8000-12000RPM 室温离心10-20分钟，弃沉淀收集上清；每1毫升上清液加纯化液D  1毫升，室温避光倒转20分钟。

6、8000-12000RPM 室温离心10-20分钟，收集沉淀用纯化液B收集溶解沉淀到原单克隆抗体腹水体积的1/2。

7、透析袋用PBST浸泡3-5分钟，然后用手揉捏数次，自来水冲净后接纯水冲洗干净，将纯化好的抗体放入用透析夹或绳扎紧。

8、透析试剂用纯水溶解配成透析液，将要透析的抗体袋子放入。抗体体积：透析液体积=1:50，4℃搅拌透析每次0.5-1小时，共3-4次。

9、8000-12000RPM 室温离心10-20分钟，收集上清测蛋白浓度最后加10/万NaN3防腐并除菌过滤加50%甘油冷冻在-20℃存放保存。

七、 注意事项：

1、本试剂对未溶血的小鼠多抗血清的纯化也有比较好的效果，但不建议您这样做，因为溶血的抗血清纯化效果欠佳。

2、离心温度不能超过37℃。

3、操作和量取试剂要细致精准。

4、溶血严重和腐败的腹水不得用于纯化。

5、不搅拌透析每次时间不得低于2小时。