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Tris 或三(羟甲基)氨基甲烷,已被广泛用作生物介质中的pH缓冲液大约35年。这种生物缓冲液的近乎理想的特性是其受欢迎的原因。Tris不吸水,易溶于水,纯度高。它不会沉淀钙盐,在室温下在溶液中稳定数月,并且似乎不会抑制许多酶系统。但是,Tris 缓冲液的化学和物理特性,使用不当可能会导致错误的pH测量的电极系统。
TRIS缓冲液中pH对电极的影响
生物化学家使用TRIS缓冲液将pH值控制在生理范围内(约7至8pH值),因为磷酸盐会导致与测试样品中的生物物质发生不良反应。然而,当要对这些溶液进行pH测量时,必须认识到另一种类型的“不良副反应”,涉及pH电极系统。
Tris缓冲液的化学和物理特性对pH值的影响
常用于生理测量(pH7至7.5)的pH范围内的tris没有大的缓冲能力。因此,在使用tris缓冲液控制样品pH值时应谨慎行事。tris相当大的温度系数(-0.028pH/°C)也值得考虑。例如,如果使用tris缓冲液对仪表进行标定,并且tris温度为20°C,则使用25°C的pH值会导致误差。所以,在使用tris进行标准化时必须使用温度pH相关性。当使用tris控制样品的pH值时,控制程度将取决于样品温度。如果样品温度变化2°C,pH控制变化约0.06个pH单位。所需的pH值控制将决定允许的zui大温度波动。
Tris缓冲液的优点
① 因为Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;
② 对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
Tris缓冲液的缺点
① 缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1;Tris缓冲液应使用不含CO2的蒸馏水或去离子水由高纯度的tris和HCl制备。
② 温度效应大,温度变化对缓冲液pH值的影响很大,所以一定要在使用温度下进行配制,室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃~4℃;
③ 易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封;
④ 此缓冲液对某些pH电极发生一定干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。