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将蛋白质从凝胶转移到固体支持物是蛋白质印迹的关键步骤。尽管这是一个简单的过程，但仍需要一定程度的优化，具体取决于蛋白质的大小和凝胶的化学性质。在这里，我们提供了一些技巧，可以有效地将蛋白质从凝胶转移到膜上。
1.根据蛋白质调整缓冲液
无论您是使用现有的实验室方案还是出版物中的方案，都可能需要根据目标蛋白重新校准缓冲液配方。您可以将Towbin转移缓冲液（25 mM Tris，192 mM甘氨酸，pH 8.3）和酒精（20％甲醇或10％乙醇或15％异丙醇）作为任何蛋白质的基本缓冲液，然后根据其进行重新校准施行。
2.蛋白质分子量很高怎么办
如果蛋白质的分子量（MW）高或pI高，则可以尝试以下缓冲液选项：配置方法：48毫摩尔Tris，39 mM的甘氨酸（20％甲醇），pH为9.2的。将5.82 g Tris和2.93 g甘氨酸[和0.375 g SDS或3.75 ml 10％SDS]溶解在蒸馏去离子水（ddH 2 O）中。加入200毫升甲醇；用ddH 2 O将体积调节至1L 。
3.以下缓冲液配置适用于半干式应用
含20％甲醇的CAPS缓冲液：10 mM CAPS（3-（环己基氨基）-1-丙烷磺酸），20％v / v甲醇，pH值为11。将2.21 g CAPS与600 ml ddH 2 O混合，将pH调节至用NaOH 11.0。将dd H 2 O加入800毫升。加入200毫升甲醇。 该缓冲液可用于分子量> 50 kD MW的蛋白质。
注意：建议使用CAPS 20％甲醇缓冲液进行湿式转移。
4.以下方式适用于半干转移
使用10–15 V持续15–30分钟。凝胶电泳完成后，立即将凝胶放在转移叠层上并开始转移。转移前，请勿将凝胶冲洗或浸泡在水或缓冲液中。Tris / Tricine凝胶可使用与Tris /甘氨酸凝胶相同的方案，尽管可能必须缩短转移时间以防止小蛋白吹过膜。孔径为0.2 µm的PVDF膜是减少这种可能性的理想选择。由于小肽易于扩散，因此平衡时间应限制在10分钟以内。
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