探针法耐氟喹诺酮牛支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Fluoroquinolone-Resistant Mycoplasma Bovis

货号：Mqt-abo-20      规格：20个反应

货号：Mqt-abo-50      规格：50个反应

货号：Mqt-abo-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1，  使用单核苷酸多态性PCR检测牛支原体喹诺酮抗性，检测单碱基突变。

2，  使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

3，  带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。

4，  带有UDG酶和dUTP，可降低残留DNA的污染。

5，  灵敏度高，检测极限相当于反应液中约含5个基因组。

牛支原体（Mycoplasma Bovis）是最重要的致病性牛寄生支原体，呈全球流行趋势，可引起肺炎、关节炎、乳腺炎、中耳炎、结膜炎、生殖紊乱和流产等多种疾病，发病率达到60%-100%。在健康或患病的牛身上均可发现牛支原体，其疾病表现和对治疗和疫苗的反应常发生变化，诊断和控制较为困难，因此其流行程度常被低估。牛支原体引起的疾病常呈慢性发展，引起动物身体虚弱，抗生素疗效不明显，因此常引起难以估测的经济损失。由于缺乏有效的牛支原体疫苗，抗生素是最主要的控制手段。

氟喹诺酮是一类广谱而且高效的抗生素，常被用于治疗牛支原体感染。氟喹诺酮通过抑制DNA复制达到抗菌的目的，其抗性则是源于细菌的DNA螺旋酶和DNA拓扑异构酶IV发生突变，导致药物结合能力下降。突变点位于DNA螺旋酶的GyrA和GyrB亚基，和/或DNA拓扑异构酶IV 的ParC和ParE 亚基，这些区域统称为喹诺酮抗性决定区域（QRDR）。体内获得的喹诺酮抗性突变只存在于ParC基因。

对氟喹诺酮抗性的检测，通常做法是用体外分离培养的菌落做敏感性测试，需要花费很长的时间，有时需3-4周才能得到结果。PCR法检测时间短，仅需几个小时即可获得结果，还具有高灵敏度和高特异性的特点，因此是更好的选择。定量PCR法与普通PCR法相比，不仅可以精确定量，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

本试剂盒采用双重探针法，既可以检测牛支原体，也可以同时检测抗性菌株。选择parC基因作为靶点，对牛支原体喹诺酮抗性菌株进行单碱基多态性PCR鉴定。在牛支原体parC基因的265位点，碱基G突变为A导致一个天冬氨酸突变为天冬酰胺，赋予支原体喹诺酮抗性。在下游间隔一个碱基的267位点，一些菌株带有T突变为C的无效突变。本试剂盒通过鉴别265位点的突变来检测菌株的喹诺酮抗性。经BLAST验证，与其他生物的基因组无交叉反应。通过检测23种支原体和8种常见细菌，未见假阳性结果，而150个牛支原体菌株均得到了阳性信号，可见本试剂盒具有非常好的特异性。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

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