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Bradford总蛋白含量测试试剂盒
（C003-1000T 酶标板法）
一、测定原理
在酸性溶液中，考马斯亮蓝G250（Coomassie brilliant blue G250）染料主要与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸和赖氨酸）和芳香族氨基酸的残基通过疏水力相结合，从而使染料的最大吸收峰由波长465nm变为波长595nm，溶液的颜色由棕红色变为蓝色。在一定蛋白浓度范围内，溶液在波长595nm处的吸光度与蛋白质浓度呈线性关系。根据标准蛋白溶液绘制标准曲线，就可通过测定样品在波长595nm的吸光度计算样品的蛋白质浓度；然后根据公式计算生物样品的可溶性蛋白质含量。
二、试剂组成
试剂一：显色液 100ml×2瓶
试剂二：2.5mg/ml结晶牛血清蛋白（BSA）标准品，0.5ml×3管
三、储存条件及有效期
试剂一：4℃避光保存；试剂二-20℃保存。可保存12个月。
四、试剂的配制
标准品的配制：移取100μL试剂二（标准品），加入900μL双蒸水，充分混匀，得到1ml浓度为250μg/ml的标准蛋白溶液，分别移取0，2，4，6，8，12，16，20μL于酶标板中，加入20，18，16，14，12，8，4，0μL双蒸水，得到0，25，50，75，100，150，200，250μg/ml的BSA标准品应用液。
五、操作步骤
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空白孔 |
测定孔 |
标准孔 |
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样品稀释液（μL） |
20 |
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标准品应用液（μL） |
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20 |
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样品溶液（μL） |
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20 |
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显色液（μL） |
200 |
200 |
200 |
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充分混匀，静置5分钟，酶标仪595nm处测吸光值 |
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六、注意事项
1. 染色液接触皮肤后较难清洗，请务必戴手套操作。
2. 本方法灵敏度高，可以测定最低至25μg/mL的蛋白质浓度，蛋白浓度过高会超出标准曲线线性范围，务必稀释后测定。推荐标曲范围0-250μg/mL，但实测0-400μg/mL浓度范围内标曲相关系数通常能够达到0.999以上。具体范围请用户根据标曲制作情况判断。
3. Bradford法测定蛋白浓度不受一般浓度还原型试剂如β-巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)影响；但受去垢剂影响。如样品处理时加入过SDS、Triton X-100、Tween 等试剂，建议改用其它方法如BCA法测定。
