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总黄酮含量测试试剂盒(C002-96T 分光光度计法)
一.测定原理
黄酮中处于相邻位的羰基、羟基可以共同络合金属而显色。在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成螯和物，加入碱溶液后显红橙色，在510nm处有最大吸收峰。芦丁是公认的黄酮类化合物，常被用作标准品。
二.试剂组成
试剂一：无色液体50mL ×1瓶
试剂二：无色液体50mL ×1瓶
试剂三：显色液200mL ×1瓶
试剂四：1.0mg/mL芦丁标准溶液5mL×1瓶
三.储存条件及有效期
试剂一、试剂二4℃保存，试剂三-20℃保存，可保存3个月。
四.试剂的配制
试剂四应用液：
取2mL试剂四，加入18mL双蒸水，稀释至20mL，得到100μg/mL的芦丁标准液，分别采用移液管移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL试剂四于空试管中，加入4.0，3.0，2.0，1.0，0mL双蒸水，得到20，40，60，80，100 μg/mL芦丁标准液。
五.操作步骤
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标准管1 |
测定管 |
空白管2 |
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试剂一应用液（mL） |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
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样品溶液（mL） |
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2 |
2 |
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试剂四应用液（mL） |
2 |
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充分混匀，室温静置6min。
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试剂二（mL） |
0.5 |
0.5 |
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双蒸水（mL） |
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1 |
充分混匀，室温静置6min。
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试剂三（mL）3 |
2 |
2 |
2 |
充分混匀，室温静置15min，以试剂空白调零，分光光度计510nm处测吸光值。
