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氮自由基（DPPH）清除能力测试试剂盒
(A001-96T 分光光度计法)
一.测定原理
DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基，有一个单电子，在517nm下有强吸收，如果有其他物质提供一个电子使此单电子配对，其吸收会消失褪色，褪色程度与接受电子的量呈正比。即反应物清除氮自由基的能力与试剂在517nm的吸光值成反比。
二.试剂组成
试剂一：DPPH试剂1mL×1瓶
试剂二：100μg/mL 维生素C标准溶液 20mL×1瓶
三.储存条件及有效期
试剂盒-20℃可保存6个月。
四.试剂的配制
试剂一：37℃平衡20min以上，待试剂融化后，在试剂瓶中加入100ml 95%乙醇或无水乙醇，剧烈震荡使试剂充分溶解。
注意：溶解一定要充分，如有条件可采用超声波助溶。
试剂二应用液：根据是否需要制作阳性对照标准曲线有两种配制方法。
1. 如仅需要将维生素C作为质控品，可取100μL 试剂二，加入900μL样品稀释液，充分混匀；
2. 如需测定维生素C的IC50，可分别移取0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0mL 试剂二于空离心管中，再依次加入10.0，9.5，9.0，8.5，8，7.5，7.0，6.0，5.0ml样品稀释液，充分混匀。配制成0，5，10，15，20，25，30，40，50 μg/mL 维生素C样品。
五.操作步骤
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空白孔1 |
测定孔 |
对照孔2 |
质控孔 |
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试剂一（mL） |
1 |
1 |
0 |
1 |
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样品溶液（mL） |
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1 |
1 |
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试剂二应用液（mL） |
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1 |
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样品稀释液（mL） |
1 |
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充分混匀，室温避光静置30min使之充分反应。选用0.5mm比色皿3，517nm处测定吸光值。
