高活性凝血酶Thrombin(from bovine)9002-04-4

HM0085

高活性凝血酶Thrombin(from bovine)

9002-04-4

Enzyme

37KD

1ku

1000MU

白色或类白色无定形粉末或固体

≥2000U/mgIVD,生化研究

Thrombin from bovine plasma

Factor IIa；凝血活素；血液凝血因子3；原激酶；凝血因子

water

-20℃，保质期3年

上海惠诚生物科技有限公司提供定性好高纯凝血酶,酶活性≥2000U/mg.上海惠诚生物的凝血酶(Thrombin)来源于牛血浆,分子量37KD,是由两条肽链（31KD和6KD）通过二硫键组成的。凝血酶是凝血酶原（凝血因子Ⅱ）激活后形成的蛋白质水解酶,Thrombin is an enzyme involved in blood coagulation and it catalyzes the reaction to convert fibrinogen to fibrin. It is present in blood as inactive prothrombin and activated to thrombin by the action of thromboplastin (thrombokinase) released from platelets in bleeding and calcium ion. Thrombin is known as blood coagulation factor IIa and prothrombin as factor II.
凝血酶Thrombin(from bovine plasma)
CAS:9002-04-4
来源：牛血浆
活力：≥2000U/mg
性状：白色或类白色无定形粉末或固体。溶于水，不溶于有机溶剂。由动物血浆分离制得的凝血酶原，再用凝血致活酶和氯化钙激活而成。是一种蛋白水解酶，血浆中的可溶性纤维蛋白原在凝血酶的激活下，转变成不溶性纤维蛋白网状结构，使血液凝固。纤维蛋白原有六条肽链组成，凝血酶的组成是从四条肽链的N端切断一定特定的肽键（—Arg—Gly），放出两个A肽（19肽）和两个B肽（21肽），另二条N端为酷氨酸的肽链没有变化。A肽和B肽切除后，减少了蛋白质分子的负电荷，促进了纤维蛋白分子的直线聚合和侧向聚合，从而形成网状结构的纤维蛋白

凝血酶使用说明：

(一)融合蛋白切割

由于凝血酶具有切割序列专一性强，水解效率高的特点，它被广泛地应用于基因工程产品的开发，其应用之一是作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性断裂，尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。

凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶，能够有效切质量比仅为1:2000的蛋白。切割可在20℃到37℃之间切割0.3到16小时。凝血酶*的切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',这里X4 和 X3 是疏水氨基酸而X1'和 X2'是非酸性氨基酸，一些经常使用的识别位点是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和MY-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他识别位点是 X2-R[K]-X1', 这里X2 或者 X1'是甘氨酸，例如A-R-G和G-K-A，这里切割发生在第二个残基后。在凝血酶切割位点和N末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切，通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完全切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。有效的消化缓冲液是20mM Tris-HCl缓冲液,含150mM氯化钠,pH8.0。凝血酶可从切割产物中用p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖移去。

(二)血小板聚集试验

凝血酶与血小板表面的凝血酶受体结合，活化血小板，使血小板粘附和聚集
血小板聚集实验参照文献：
兔血用塑料管收集和用ACD(86 mmol／L柠檬酸钠，111 mmol／L葡萄糖，53 mmol／L柠檬酸)0.15体积比抗凝，200 g离心10 min，离心2次，取上清，800g离心15 min。沉淀中加Tyrode—Hepes缓冲液(140 mmol／L NaCl，5 mmol／L KCl，1 mmol／L MgCl2，10 mmol／L Hepes，10mmol／L葡萄糖，pH 7.4)调节至血小板数为(3～4)×1011／L。血小板聚集用血液凝集仪来测定。血小板悬液(0.2ml )与药物温育1 min，然后用凝血酶(500 u／L)作用5 min，记录聚集情况。

凝血酶产品特点：
1、纯度高：SDS-PAGE检测图谱无杂蛋白条带；
2、比活高：比活力大于2000单位/mgpr；
3、不含有其他蛋白酶活性；
4、灭活病毒:凝血酶生产过程中采用S/D法和干热法两步灭活病毒；
5、产品稳定性好：冻干产品在室温条件下考察12个月，酶活力未见显著变化，冷藏条件下保存36个月，凝血酶酶活力未见显著变化；
6、性价比及其突出，尤其对于工业客户