人凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒

【背景】：凝血因子 IX， 又名 FIX 和 F9， 是一种丝氨酸蛋白酶， 属于肽酶家族 S1。 F9 作为一种酶原、非活性前体被产生， 接着进行一系列的加工过程 — 去除信号肽、 糖基化， 然后被因子 XIa 或因子 VIIa 裂解成一个由二硫键连接的双链形式。 抗凝血酶可抑制 F9。 另外， 在人类和小鼠中， F9的表达量随着年龄的增加而增加。缺乏 F9 会导致血友病 B 的发生。在超过 100 个 F9 突变体中，一些不引起任何症状， 但是许多会引发明显的出血障碍。重组 F9 可被用来治疗血友病 B，市场上可买到 BeneFIX 和 Alprolix。一些罕见的 F9 突变会导致凝血活性升高， 导致凝血疾病， 如深部静脉血栓形成。先天缺乏 F9 的患者在进行外科手术时， 氨甲环酸可能会降低其围手术期的出血风险。

【检测原理】：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人FIX单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的FIX与固相抗体和检测抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素 (streptavidin-HRP)。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中FIX浓度成正比。加入终止液终止反应，在 450 nm 波长测定吸光度值。                                                                                  

【实验方法】：双抗夹心ELISA（定量）                                                                                                                         

【样本类型】：血清、血浆、细胞上清、组织等相关生物样本。                                                                                                 

【规格型式】：96孔板、48孔板，可拆卸                                                                                                                                             

【保存条件】：试剂盒未拆开，2-8℃保存。已拆开，标准品-20℃保存，其它2-8℃℃保存。                                                                           

【有效期】：6个月。                                                                                                                                                     

【检测范围】：625-40000pg/ml。                                                                                                                                  

【灵敏度】：50.0pg/mL。敏感性/最低检测浓度计算方式：敏感性等于20个空白对照孔的平均O.D.值加上2个标准差后对应的浓度。样品的O.D.读数只有在高过敏感性指标的时候才具有统计学显著性。                                                                                                                                                                                               

【变异系数】：板内变异系数<10%,板间变异系数<15%。                                                                                                                                          

【回收率】：三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次回收率评估，回收率在85%-115%之间。

【需用户自己提供的实验器材和试剂】：                                                                                                                                              1. 96孔读板仪器。
2. 自动洗板机.
3. 移液器和枪头。建议使用多通道移液器/排枪。
4. Eppendorf 管。
5. 额外洗板缓冲液 (neutral PBS 或 TBS。试剂盒内提供足量。如需额外缓冲液可参考如下配方)。
0.01M TBS: Add 1.2g Tris, 8.5g Nacl; 450μl of purified acetic acid or 700μl of concentrated hydrochloric acid to 1000ml H2O and adjust pH to 7.2-7.6. Finally, adjust the total volume to 1L.0.01M PBS: Add 8.5g sodium chloride, 1.4g Na2HPO4 and 0.2g NaH2PO4 to 1000ml distilled water and adjust pH to 7.2-7.6. Finally, adjust the total volume to 1L.*样品准备的相关试剂也不含在试剂盒中。