色原底物ESPMT化学名称为N-乙基-N-磺丙基-3-甲基苯胺钠盐,也简称TOPS,属于新型Trinder’试剂中的一种,广泛应用于葡萄糖、甘油三酯、胆固醇等生化指标的检测。比如ESPMT用于肌酐的肌氨酸氧化酶(SOX)法测定。
血清和尿中都含有肌酐,它是肾功能常用的常用指标,也是健康体检的必检项目。肌酐(creatinine,Cre),化学式是C4H7N3O,是肌肉在人体内代谢的产物,主要由肾小球滤过排出体外。每20克肌肉代谢克产生1mg肌酐。
色原底物ESPMT测定肌酐
ESPMT测定肌酐原理:
肌酐在肌酐酶(肌酐亚氨基水解酶)的催化下水解成肌酸,肌酸在肌酸酶CRH(肌酸脒基水解酶)催化下水解成肌氨酸和尿素,然后用肌氨酸氧化酶SOX将肌氨酸氧化成甘氨酸、甲醛以及过氧化氢。生成的过氧化氢即可以用ESPMT与4-AAP在过氧化物酶存在下进行测定,生成的显色产物含量与肌酐浓度成正比,与光度计测得的吸光度成正比。
试剂准备:
试剂1,由肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化氢酶、ESPMT组成;试剂2,由肌酐胺基水解酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林(4-APP)组成;校准品:肌酐溶液。
试剂要求:
试剂溶液应为清澈透明的液体,无沉淀、悬浮物和絮状物。
液体试剂的净含量应不少于标示值。
试剂以去离子水为空白对照,在37摄氏度546nm波长条件下,吸光度应小于0.2A。
当样本浓度为60umoL/L时,吸光度变化应不小于0.016A。
试剂检测范围应在10-7000umoL/L,线性相关系数r应不小于0.9900,当样本浓度不大于390μmol/L时,线性绝对偏差应不大于±39.0μmol/L;当样本浓度大于390μmol/L时,线性相对偏差应不大于±10.0%。变异系数小于0.03,相对偏差小于0.05。
以色原底物ESPMT测定肌酐是比较常用的方法,由于过程中会生产肌氨酸和尿素,也可以通过尿素检测的方法来测量,灵敏度不如SOX法。德晟可提供肌酐检测所需的色原ESPMT、酶制剂CRH、SOX、缓冲剂等等。