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三羟甲基氨基甲烷Tris饱和酚和水饱和酚的区别

2020-11-19 15:24320
Tris(三羟甲基氨基甲烷)作为一种常用的生物缓冲剂在生物化工领域有非常广泛的应用,比如核酸纯化,而饱和酚在核酸纯化中有2种,一种为Tris饱和酚,也称为碱性酚、Tris平衡酚(Trissaturatedphenol或Trisbalancedphenol),是用Tris-ClpH8.0饱和过的重蒸酚,为浅黄色透明液体,有刺激性气味,上层为Tris盐酸缓冲液,溶液内加有抗氧化的8-羟基喹啉。适用于从核酸样品中去除蛋白质,提取DNA等。
Tris饱和酚一般PH大于7.8,其中,酚是强的蛋白变性剂,可以使细胞或组织中的蛋

白质变性析出。而Tris的主要作用是防治止酚类氧化,若酚类氧化,则会形成醌(两个苯环),醌含有强自由基,会破坏核酸结构。同时,由于PH值大于7,在碱性环境中DNA处于水相,RNA处于有机相。从而分离上清,即可得到DNA。


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另一种就是酸性酚,也就是水饱和酚,用于提取RNA。又叫水平衡酚(Water Saturated Phenol 或Water balancedphenol)。水饱和酚的PH一般4.7-5.5,通常与异硫氢酸胍(或0.1%, 0.2%β-巯基、乙醇)一起使用,用于细胞RNA的提取,这样DNA在酚相,RNA 在水相。两者就分开了。
Tris饱和酚的配置:
1、冰箱取出重蒸酚,室温放置至68度水浴溶化,切勿立即放入68度的水浴中,以防玻璃炸裂;
2、加8-羟基喹啉至0.1%和β-巯基乙醇至0.2%,(原液14.4MOL/ML),混匀,溶液呈现黄色,倒入分液漏斗中(也可在烧杯中进行);
3、加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后,静至分层;放出下层黄色酚液,弃上层;
4、加固体Tris约1g/100ml酚,摇匀,去水相;
5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡数次,至PH为8.0;
6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中,4度保存;
7、如黄色消失或呈粉红色(说明酚已经被氧化),则不能使用。
重蒸酚为白色针状结晶体,有较强的腐蚀性,应尽量避免皮肤接触或吸入体内。如发现变为红色或棕色,表明发生氧化,不能使用。保存条件需要在-20℃下避光保存。Tris饱和酚为有毒、刺激性物体,需要在通风橱中操作。

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