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氨丁三醇Tris缓冲液配制细则

2020-11-10 14:41430
氨丁三醇CAS77-86-1,简称Tris,俗名三羟甲基甲胺或者三羟甲基氨基甲烷,配制成的缓冲液pH范围7-9,离子强度低,这个pH范围的适用于大多数生物化学反应。因此Tris缓冲液广泛的用于蛋白质电泳、蛋白质印迹、核酸琼脂糖凝胶电泳等实验。
氨丁三醇Tris有着比磷酸缓冲液更优越的性能,但又比更专业的缓冲液(HEPES、PIPES等)价格成本要低许多,所以使用Tris缓冲剂用于生物化学实验是优先选择。Tris在溶液中的解离常数pKa为8.1(25度),有效的缓冲范围是7.1-9.1,能满足绝大多数生化实验。
Tris溶液本身显碱性,通常搭配酸一起组成缓冲体系,常用的就是Tris-HCl缓冲液。其配置方法通常使用如下两种:

氨丁三醇(三羟甲基甲胺)
将Tris试剂粉末溶于水,然后与盐酸溶液以不同比例混合,以获得不同pH的Tris-HCl缓冲溶液。
直接将Tris-HCl试剂粉末溶于水,可以直接获得对应pH值的缓冲液;Tris-HCl的等分试剂配制成的特定pH值的缓冲液,调节pH可与HCl溶液混合(或Tris溶液调节)。
配制Tris-HCl缓冲液时,用HCl调节pH值,然后将缓冲液补足至所需体积。假设在调节pH值时没有过冲,则该方法不会改变缓冲液的离子强度。
但是,在过冲并用NaOH调节pH或者用Tris HCl重新调节并用NaOH调节pH之后,由于NaOH是强电解质,离子强度会发生变化。根据Tris缓冲液不同的预期用途,这种改变可能会造成影响。
在Tris缓冲液的配制过程中通常需要调节pH值,测pH值时要使用与Tris兼容的电极。当与Tris缓冲液一起使用时,单结Ag / AgCl电极可能表现出不稳定性,因为银会逐渐沉淀并堵塞电极。使用双结或甘汞参比电极可确保在Tris缓冲液中进行准确的pH测量,不会形成沉淀堵电极。
氨丁三醇Tris试剂有各种各样配制好的缓冲体系,除了Tris-HCl,还有TE、TBS、TAE、TBE等。德晟生产的主要是Tris试剂原料,可以制作上述多种缓冲液,而且需求量非常大。

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